Tavanomainen pylväskromatografia
2. Kromatografinen sarake (kiertotyyppi)
3. Kromatografinen sarake (käsikirja)
*** Hintaluettelo koko yllä, kysy meiltä saadaksesi
Kuvaus
Tekniset parametrit
Tavanomainen pylväskromatografiaHyödyntää eri aineiden jakautumissuhteiden eroa paikallaan olevan vaiheen ja liikkuvan faasin välillä tai kiinteiden faasien erilaisia retentiokapasiteetteja suhteessa eri aineisiin aineiden erottamisen saavuttamiseksi. Kun seos virtaa kromatografisen pylvään läpi liikkuvan faasin kanssa, se on vuorovaikutuksessa sarakevaiheessa sijaitsevan vaiheen kanssa (kuten liukeneminen, adsorptio jne.). Kunkin komponentin fysikaalisten ja kemiallisten ominaisuuksien ja rakenteiden eroista seoksessa, niiden vuorovaikutuksen suuruus ja lujuus kiinteän vaiheen kanssa myös vaihtelevat. Samassa liikkeellepanevassa voimassa kunkin komponentin retentioaika paikallaan olevassa vaiheessa on erilainen, joten seoksen komponentit virtaavat pylväästä tietyssä järjestyksessä saavuttaen erottelun.
Parametri
Torjunta -ainejäämien havaitseminen
 |
 |
 |
 |
Sanomme useinTavanomainen pylväskromatografiaon oikeastaan pylväskromatografia, joka tunnetaan myös nimellä pylväskromatografia. Venäläiset tutkijat keksivät ja käyttivät sen ensin vuonna 1903. Se murskasi kasvipigmenttien liuoksen kalsiumkarbonaattijauheeksi ja löysi kalsiumkarbonaattijauheen eri värinauhat ylhäältä alas. Erottamalla ja uuttamalla eri värinauhoja, saatiin suhteellisen puhdas klorofylli, luteiini jne..
Sadan vuoden kehityksen jälkeen tästä menetelmästä on tullut suhteellisen kypsä, ja paikallaan oleva faasi on myös kehittynyt yhdestä kalsiumkarbonaattijauheesta alumiinioksidiin (joka voidaan jakaa happamaan, neutraaliin, alkaliseen), piidionegeliin, aktivoituun hiileen jne. Niiden kesken, piidioppi on yleisimmin käytetty päälaboratorioissa, yleensä jaettuna normaali vaihe -piidioppi ja päinvastainen piidespidemäärä gel!
Kiinteä faasi (piidionegeli) on yleensä puhdistettava ja aktivoitava, ja hiukkaskoon tulisi olla tasainen. Teoriassa mitä pienempi hiukkaskoko ja mitä suurempi pinta -ala yksikkö massaa kohti, sitä suurempi adsorptiokyky ja sitä parempi erotusvaikutus.
Käytännöllisessä käytössä, kun kiinteät faasihiukkaset ovat liian pieniä, on usein kahta tilannetta: yksi on, että ne ovat kevyempiä painossa ja kelluvat helposti ilmassa (piidionegeeliä ei voi hajottaa ihmiskeho ja mitä hienompi, sitä myrkyllisempi se on); Toiseksi pienet hiukkaset voivat myös johtaa pieniin aukkoihin hiukkasten välillä, mikä johtaa hitaaseen liuotinvirtausnopeuteen ja ajan kulutukseen; Esimerkiksi silikonin ottaminen silikonin suurin kaupallisesti käytetty koko on tällä hetkellä 200-300 verkko.
Pylvään ohitusmenetelmien suhteen automaattisten analyysilaitteiden, kuten eteenpäin suuntautuvan kiertovalmistuksen, nestemäisen vaiheen valmistuksen ja aiemmin mainittujen pylväiden ohimennen koneiden lisäksi, manuaalinen pylväs jaetaan pääasiassa kolmeen tyyppiin: ilmakehän painepylvään ohittaminen, masennuspylväs ja paineiskunnainen pylväs.
Niiden joukossa pylvään kautta tapahtuva masennus johtaa huonoon adsorptiotehokkuuteen, joka johtuu eluentin nopeasta virtausnopeudesta, mikä johtaa useimpien lokeroiden lukumäärän ja huonon erotustehokkuuden menetykseen. Se sopii näytteiden erottamiseen suhteellisen avoimilla TLC -levyillä, etenkin näytteille, joissa tuotteessa on vain yksi suuri polaarinen epäpuhtaus; Suurin osa ajastaan käytetään yhdisteiden esikäsittelyyn, poistamalla joitain epäpuhtauksia ennen huolellista puhdistamista. On huomattava, että negatiivisen paineen aiheuttama liuottimen haihtuminen käytön aikana voi johtaa suuren määrän vesipisaroiden tiivistymiseen pylvään ulkopinnalle. Vesiherkkiä yhdisteitä ei tulisi yrittää helposti.
Ilmakehän painepylväs on tehokkain erotusmenetelmä kolmen välillä, mutta koska liuotin liikkuu usein liian hitaasti, jopa paras erotusvaikutus voi vaikuttaa tehokkuuteen. Siksi painetta kohdistetaan yleensä tällä hetkellä, jota kutsutaan paineistetun sarakkeen ohimennen; Mutta paineen ei pitäisi olla liian korkea. Yleensä manuaaliseen toimintaan käytetään kaksoisketjupalloa, ja automaattiseen käyttöön käytetään kalapumppua. Molempia voidaan muokata kuvan osoittamalla tavalla.
Tavanomainen sarakkeen ylitysprosessi:
Valmistustyö tulisi tehdä hyvin:
Kun valitset saraketta, tarkkaile onko hiontakortti. Muista täyttää pohja pylväiden kohdalla ilman hiontatauluja. Puuvillan ei tulisi olla liian paksu tai liian ohut, niin kauan kuin se voi estää silikonin tulemisesta. (Bloggaaja purkasi suoraan vaatteiden ripustimen ja käytti sitä puuvillaa asettamaan pistorasian poistoaukkoon)
Valmistele vähimmäisnapaisuuselentti, UV -lamppu (suositellaan laboratoriohenkilöstölle, kädessä pidettävälle, valmis ottamaan valokuvan milloin tahansa), painevälineitä ja koeputkihyllyä tarvittaessa!
Valitse sopiva sarake, lisää silikonigeeli, liota silikonigeeli ja tasoita se
ValintaTavanomainen pylväskromatografiaon erittäin tärkeä, ja niiden koko tulisi laskea tuotteen määrän perusteella, joka voidaan yleensä jakaa:
Muutama milligramma sarakkeesta (lopullinen valinta kokonaissynteesille);
Useiden kymmenien milligrammien (metodologinen laajennusalusta) sarake;
500 milligrammaa 1 grammaan sarakkeeseen (käyttämällä menetelmää raaka -aineena);
Pylväät noin 5 g ja suurempia asteikkoja.
Pylvään halkaisijan yleisin suhde laboratoriossa on yleensä välillä 1: 2,5 - 1:15. Silikageelin määrä, jota käytetään paikallaan olevana faasina näytteen kuormituksen aikana, on noin 20 - 40 kertaa näytteen määrä. Sarakkeiden valitsemisen standardin tulisi perustua näytteen TLC -levyn kiipeilytilanteeseen. Jos läheisyydessä on monia epäpuhtauksia, yritä valita suurempi pylväs mahdollisimman paljon, jotta näyte voidaan peittää pienellä ohuella kerroksella (suositeltu paksuus alle 5 mm). Jos epäpuhtaudet ovat kaukana, tätä paksuutta voidaan luonnollisesti lisätä, mutta ei ole suositeltavaa, että näytteen paksuus ylittää 2 cm, ellei tuote yksinkertaisesti pestä.
Monet ihmiset tekevät virheen ajatellessaan, että lisäämällä silikonia, vaikka se olisi paksumpi näytteessäni, voidaanko se erottaa hyvin? Tämä vastaus on negatiivinen!
Syynä on, että nämä ihmiset eivät koskaan ajatelleet, että alla olevat ja yläpuolella olevat näytteet eivät olleet käynnissä samalla linjalla, joten he voivat saada vain joitain puhtaita, joista suurin osa oli ylitetty, puhumattakaan epäpuhtaista, tuhlaa aikaa ja liuottimia!
Siksi myös näyte vaatii ohenemista!
Sarakkeen valitsemisen jälkeen silikonin lisääminen voidaan tehdä ruokintasuppilon kautta. Samanaikaisesti varmista, että käytät naamaria ja toimi hölynpesukoneessa. Blogger (silikoosi) ei tarkoita tätä syytä tähän.
Mitä tulee piidioksidigeelin tunkeutumiseen, suositeltu prosessi on: Aseta ensin piidioeli -geelipylväs pystysuunnassa asennetulla piidioksidigeelillä, tasoita silikageelin pinta kädelläsi, kytke piidioligeelipylvään pohja vesipumppuun, pumppaa piidioksidigeeliä ja kaada sitten vähiten polaarinen eluentti ylhäältä. Kun eluentti aikoo vuotaa, sulje sulkuventtiili estääksesi liuottimen pumppaamisen vesipumppuun.
Sitten paineessa silikonigeeli voidaan liottaa tasaisesti huuhtelemalla seitsemän tai kahdeksan pylvään tilavuutta pienimmällä määrällä kehitysmiestä.
Yllä oleva näyte
Näytteenotto on jaettu märään näytteenottoon ja kuivaan näytteenottoon.
(1) Märkä näytteenotto.
Suositeltava menetelmä on käyttää pipettiä, jossa on kumikärki, imeä näytteessä, lähellä silikonigeelin yläosaa, tiputa näyte hitaasti ja tasaisesti, kunnes se kattaa kerroksen, lopeta näytteen lisääminen ja kohdista jonkin verran painetta upottaaksesi öljyinen aine silikonigeelikerrokseen; Upota öljyinen aine silikonikerrokseen ja toista tämä prosessi useita kertoja, kunnes kaikki näytteet on ladattu!
Jotkut uudet opiskelijat saattavat olla uteliaita, miksi tämä operaatio suoritetaan sen sijaan, että pistäisi märkä prosessiöljyä, kuten ainetta kerralla?
Itse asiassa tämä toimenpide voi vähentää näytekerroksen tehokasta korkeutta. Tässä vaiheessa pylväskromatografia on jo alkanut, ja myöhemmät näytteet ovat kuin liuottimet, jotka työntävät aiemmat näytteet adsorbiin ja desorbiin piidionegeelissä.
(2) Kuivassa näytteenotossa.
Ellei ehdottoman välttämätöntä, sitä ei suositella. Kiinteitä näytteitä suositellaan enemmän lyömään tai kiteytymään. "Häikäilemättömät menetelmät, etyyliasetaatti vs. vesi, ultraääni värähtely, joka avustetaan korkean kiehuvan öljyn kiteytymistä" ja "laboratorion uudelleenkiteyttämismenetelmän jakamista".
Kuiva näytteenotto tuo yleensä kaksi ongelmaa; Toisaalta näytteen sekoitusprosessin aikana näytteen ja piidiolegelin välinen reaktiomahdollisuus kasvaa, koska tarve nostaa lämpötilaa kiertohaihdutukseen; Toisaalta kuivakuormitus tarkoittaa, että adsorbentit viedään näytekerrokseen, mikä lisää näytekerroksen korkeutta tai pylvään kokoa, mikä vaatii enemmän aikaa ja enemmän liuotinta.
Jos muuta valintaa ei ole, kaada adsorboitunut jauhe hitaasti pylvääseen lastausta varten, ja jotkut vaatimukset ovat samanlaisia kuin märät menetelmät.
Lisää vedetön natriumsulfaatti tai kvartsihiekka
Näytekerroksen vaikuttamiseksi eluentin lisäämisen aikana aiheuttaen epätasaisuutta, muodonmuutoksia ja vaikuttavan erottelutehokkuuteen, vedettömän natriumsulfaatin tai kvartsihiekan kerros asetetaan yleensä näytekerroksen päälle.
Insinöörimme henkilökohtaisesti mieluummin asettavat vedettömät natriumsulfaatit, koska sillä on myös kuivaustoiminto ja se on ystävällinen liuottimille, kuten dikloorimetaanille, jotka ovat alttiita haihtumiseen, lämmön imeytymiseen ja kondensaatioon!
Gradientin eluutus, näytteenotto ja keräys
Kuormituksen jälkeen huuhtele sarake ensin pienellä polaarisella liuottimella (liuotin, joka ei salli tuotteen kulkemista läpi) 2-3 -sarakkeen tilavuuksille (yksi sarakkeen tilavuus määritellään liikkuvan vaiheen virtaavan ja ulos) tilavuutena) varmistaaksesi tasaisuuden ja valitse sitten osuus eluutiolle.
Kuinka valita pylvään läpi kulkeva eluentti?
Eluentin suhde on suhde, kun tuotteesi saavuttaa RF -arvon noin 0. 2 TLC -levyllä
Tämä on kokemus sarakkeen pesusta, jonka olen lukenut monia kirjoja ja jaettuja, ja todellinen prosessi on myös hyvin samanlainen. Henkilökohtaisesti mieluummin vähentän kaltevuutta kahdesti.
Esimerkiksi, jos TLC -levykiipeilyn liuotin on PE/EA =2: 1, bloggaaja aloittaa todennäköisemmin gradienttielokut PE/EA =4: 1: stä ja päättyy PE/ea =2: 1, mikä johtaa yleensä parempia tuloksia.
On myös tekniikoita eluenttien keräämisessä. Voit ensin valita suuremman koeputken sen vastaanottamiseksi, ja kun TLC lähestyy kohdepistettä, vaihda pienempään koeputkeen. Tämä voi vähentää mahdollisuutta saada enemmän ja välttää epäpuhtauksia.
Jos kohtaat tilanteita, joissa epäpuhtauspisteet ja tuotepisteet ovat lähellä toisiaan, etenkin ne, joilla on heikko fluoresenssi, muista olla painostamatta. Sen sijaan valitse pylväs normaalin paineen alla ja vaihda putki joka kerta, kun puolet tai vähemmän putket on kytketty, mikä voi myös lisätä puhdistuksen todennäköisyyttä.
Muista olla käsittelemättä pylvästä ajoissa!
Monilla ihmisillä on tapana olettaa, että pylväs on ohitettu ja kuivattu, kun yhdessä tai kahdessa putkessa ei ole tuotetta TLC: n jälkeen myöhemmässä vaiheessa.
Tajusin vain, että sato oli liian alhainen, kun lasin sen tai kun menin tekemään spektrin, huomasin, että spektri oli väärä ja jäi väärään kohtaan. Pahoittelin sitä syvästi.
Joten on suositeltavaa, että et kiirehdi käsittelemään saraketta halutun pisteen suorittamisen jälkeen. Suorita sen sijaan ydinmagneettiresonanssi vastaamaan satoa ennen käsittelyä.
Jos olet kiireinen tai kiireellisesti puhdistaa muut yhdisteet tämän kanssaTavanomainen pylväskromatografia, on suositeltavaa huuhdella korkealla napaisella hyvänlaatuisella sekoitetulla liuottimella ja jättää tämä eluentin osa erikseen tunnistustulosten saavuttamiseksi.
Suositut Tagit: Tavanomainen pylväskromatografia, Kiinan tavanomainen pylväskromatografiavalmistajat, toimittajat, tehdas
Seuraava
KapillaaripylväskromatografiaLähetä kysely
