HPLC -pylväskromatografia
2. Kromatografinen sarake (kiertotyyppi)
3. Kromatografinen sarake (käsikirja)
*** Hintaluettelo koko yllä, kysy meiltä saadaksesi
Kuvaus
Tekniset parametrit
HPLC -pylväskromatografia, joka tunnetaan myös nimellä korkean suorituskyvyn nestekromatografia (korkean suorituskyvyn nestekromatografia), on pylvään nestekromatografia, jolla on korkea erotustehokkuus, ja se on myös tärkeä kromatografian haara.
Se erottaa näytteen komponentit adsorptiovoiman ja jakamiskertoimen eron mukaan kiinteän vaiheen ja liikkuvan faasin välillä. Korkeapaineen infuusiojärjestelmän, liikkuva faasi (yleensä yksi liuotin tai liuottimien seos, jolla on erilaiset polaarisuudet) pumpataan pylvääseen, joka sisältää kiinteän vaiheen. Kun näytteen jokainen komponentti kulkee kromatogrammipylvään läpi johtuen vuorovaikutuksen eri koosta ja lujuudesta paikallaan olevan vaiheen kanssa (kuten adsorptio, jakauma, poissulkeminen, affiniteetti), myös paikallaan olevassa vaiheessa viipymisaika on erilainen, jotta kunkin komponentin erottaminen saavutetaan. Erotetut komponentit syöttävät sitten ilmaisimen havaitsemista varten, mikä saa kvalitatiivisen ja kvantitatiivisen tiedon kunkin komponentin.
Parametri
Sovellukset farmaseuttisessa analyysissä
HPLC -pylväskromatografian soveltaminen lääkynalyysissä
Tärkeänä erotusanalyysitekniikkana korkean suorituskyvyn nestekromatografia (HPLC) on osoittanut suurta sovelluspotentiaalia ja arvoa farmaseuttisen analyysin alalla sen nopean kehityksen jälkeen 1970 -luvulla. Yhdistämällä klassisen nestekromatografian ja kaasukromatografian erotusperiaatteet, HPLC: stä on tullut välttämätön työkalu lääkkeiden analysoinnissa sen tehokkaan erottelun, nopean analyysin, erinomaisen havaitsemisherkkyyden ja laajan sovellusalueen suhteen.
Perusperiaatteet ja ominaisuudet
Siinä käytetään kiinteiden ja liikkuvien vaiheiden vuorovaikutusta seoksen eri komponenttien vähitellen erottamiseksi. Kiinteä faasi voi olla kiinteä tai neste, joka on kiinnitetty kiinteään, kun taas liikkuva faasi on neste tai kaasu. HPLC: ssä liuotin pakotetaan pylvään läpi korkeilla paineilla jopa satoihin ilmakehiin, mikä parantaa huomattavasti erotustehokkuutta. Eri erotusmekanismin mukaan HPLC voidaan jakaa normaalivaiheen HPLC: hen, käänteiseen faasiin HPLC, ioninvaihto HPLC ja tilavuuden poissulkeminen HPLC. Jokaisella tyypillä on erityinen levitysalue ja erotusmekanismi, kuten normaali faasin HPLC, erottamiseen napaisuuden perusteella ja käänteinen faasi HPLC erottamiseksi hydrofobisilla vuorovaikutuksilla.
HPLC -pylväskromatografian ominaisuudet heijastuvat pääasiassa seuraavissa näkökohdissa:
Korkea erottelutehokkuus: HPLC mahdollistaa kompleksiseosten tehokkaan erotuksen korkeapaine -infuusiopumppujen ja korkean suorituskyvyn pylväiden ansiosta.
Korkea herkkyys: Nykyaikaiset ilmaisimet, kuten ultraviolettien absorptioilmaisimet, fluoresenssin ilmaisimet, massaspektrometrian ilmaisimet jne., Tee HPLC: n erittäin korkea havaitsemisherkkyys.
Laaja sovellusalue: HPLC: tä ei rajoiteta näytteen volatiliteetti ja lämpöstabiilisuus, ja se voi analysoida lämpövapaita fysiologisia aktiivisia aineita, joilla on korkea kiehumispiste, eikä niitä ole helppo höyrystää.
Korkea automaatiotaso: Useimmat nykyaikaiset HPLC -instrumentit on varustettu automaattisella näytteenottimella ja dataprosessorilla, mikä voi toteuttaa analyysin ja nopean tiedonkäsittelyn automatisoinnin.
 |
 |
 |
 |
Erityinen sovellus lääkynalyysissä
HPLC: tä voidaan käyttää lääkekoostumusanalyysiin lääkkeiden aktiivisten aineosien ja haitallisten epäpuhtauksien määrittämiseksi. Esimerkiksi flavonoidien, alkaloidien ja muiden aktiivisten aineosien analysoimalla kiinalaisissa lääkemateriaaleissa voidaan määrittää, että lääkkeiden laatu ja tehokkuus voidaan määrittää aktiivisten aineosien tyypit ja sisältö. Lisäksi HPLC: tä voidaan käyttää myös lääkekoostumusanalyysiin länsimaisissa farmaseuttisissa annosmuodoissa, kuten injektioissa, tabletteja, kapseleita jne., Jotta varmistetaan, että lääkkeen koostumus lääkkeessä täyttää määriteltyjä vaatimuksia.
HPLC: llä on tärkeä rooli lääkepitoisuuden määrittämisessä. Määrittämällä lääkkeen pitoisuus tarkasti lääkkeen, lääkkeen turvallisuus ja tehokkuus voidaan varmistaa. Esimerkiksi antibioottilääkkeiden analyysissä HPLC: tä voidaan käyttää lääkkeen antibioottipitoisuuden määrittämiseen lääkkeen antibakteerisen vaikutuksen arvioimiseksi. Lisäksi HPLC: tä voidaan käyttää myös lääkkeiden pitoisuuden määrittämiseen organismeissa, kuten plasmassa, virtsassa, kudoksessa ja muissa biologisissa näytteissä, lääkkeiden tehokkuuden ja haittavaikutusten arvioimiseksi.
HPLC: llä on myös tärkeä rooli lääkkeen laadun arvioinnissa. Vertaamalla lääkkeiden eri erien analyyttisiä tietoja on mahdollista arvioida, onko lääkkeiden laatu vakaa. Lisäksi HPLC: tä voidaan käyttää myös uusien lääkkeiden tehokkuuden ja farmakokineettisten ominaisuuksien tutkimiseen, mikä tarjoaa tieteellistä perustaa uusien lääkkeiden kehittämiselle ja markkinoinnille. Esimerkiksi uusien lääkkeiden kehityksen vaiheessa uusien lääkkeiden imeytyminen, jakautuminen, aineenvaihdunta ja erittyminen eläimissä voidaan määrittää HPLC: llä, jotta voidaan ymmärtää uusien lääkkeiden tehokkuus ja farmakokineettiset ominaisuudet ja antaa vahvaa tukea uusien lääkkeiden kliinisille tutkimuksille ja markkinointisovelluksille.
Kiraaliset lääkkeet viittaavat lääkimolekyyleihin, joissa on kiraalikeskuksia, ja niiden enantiomeerit voivat vaihdella merkittävästi in vivo -aktiivisuudessa, aineenvaihdunnassa ja toksisuudessa. Siksi kiraalisten lääkkeiden enantiomeerien eristäminen ja määrittäminen on suuri merkitys. Tällä kromatografialla on tärkeä rooli kiraalisen lääkkeen analysoinnissa. Esittelemällä kiraalista paikallaan olevaa faasi- tai kiraalista liikkuvaa faasilisäainetta, kiraalinen lääkkeen enantiomeerit voidaan erottaa ja määrittää tehokkaasti. Esimerkiksi optisesti aktiivisille aminohapposääkkeille eri enantiomeerit voidaan erottaa ja määrittää tämän kromatografian avulla lääkkeen biologisen aktiivisuuden ja toksisuuden arvioimiseksi.
Luonnolliset lääkkeet ovat peräisin monista lähteistä, joissa on monimutkaisia koostumuksia, ja ne voivat sisältää erilaisia bioaktiivisia yhdisteitä. Pylväskromatografialla on tärkeä rooli luonnollisten lääkkeiden analysoinnissa. Optimoimalla kromatografiset olosuhteet ja valitsemalla sopivan liikkuvan vaiheen, aktiivisten komponenttien tehokas erottaminen ja määrittäminen luonnollisissa lääkkeissä voidaan toteuttaa. Esimerkiksi tätä kromatografiamenetelmää käytettiin kiinalaisen kasviperäisen lääketieteen, kuten flavonoidien ja saponiinien aktiivisten komponenttien, erottamiseen ja määrittämiseen niiden tyyppien ja sisällön ymmärtämiseksi sekä kiinalaisen kasviperäisen lääketieteen laadunvalvonnan, kehittämisen ja hyödyntämisen tarjoamiseksi.
HPLC -pylväskromatografian edut ja haasteet lääkynalyysissä
Kromatografisella menetelmällä on korkea erotustehokkuus, korkea herkkyys, laaja sovellusalue ja korkea automaatiotaso lääkynalyysissä. Käytännöllisessä sovelluksessa se on kuitenkin myös joitain haasteita. Esimerkiksi näytteen esikäsittely on erittäin vaativa näytteen puhtauden ja stabiilisuuden varmistamiseksi; Korkeat analyyttiset kustannukset, mukaan lukien instrumenttien hankkiminen, ylläpito, kromatografinen ja liikkuva vaiheen kulutus; Lisäksi joillekin komponenteille, joilla on vahva napaisuus tai suuri molekyylipaino, HPLC ei ehkä pysty erottamaan tai havaitsemaan huonosti. Siksi käytännöllisissä sovelluksissa sopivin analyysimenetelmä tulisi valita tiettyjen lääkkeiden laatuvaatimusten ja todellisen tilanteen mukaisesti.
Tulevaisuudennäkymät
Tieteen ja tekniikan edistymisen sekä korkean suorituskyvyn nestekromatografiatekniikan kehittämisen myötä sen soveltaminen lääkynalyysiin on laajempaa. Toisaalta uusien kiinteiden vaiheiden materiaalien kehittäminen laajentaa huomattavasti korkean suorituskyvyn nestekromatografian sovellusaluetta ja parantaa erottelutehokkuutta ja selektiivisyyttä. Toisaalta HPLC -instrumentit ovat älykkäämpiä ja automatisoituneempia, seurata sarakkeen tilaa reaaliajassa integroiduilla anturilla, mahdollistaa ennustavan ylläpidon, vähentää seisokkeja ja optimoida kokeellisia prosesseja. Lisäksi yhdistettynä Big Data -analyysitekniikkaan järjestelmä voi säätää automaattisesti käyttöparametreja vastaamaan eri näytteiden parhaimpia erotusolosuhteita parantaen tulosten kokeellista tehokkuutta ja luotettavuutta. Nämä edistysaskeleet tarjoavat tehokkaampia, tarkempia ja luotettavia analyyttisiä työkaluja lääkkeiden analysointiin, mikä johtaa lääkkeiden löytämisen ja laadunvalvonnan kehittämiseen.
Yhteenvetona voidaan todeta, että tällaisella kromatografialla on tärkeä rooli huumelianalyysissä, ja sillä on laajat soveltamisnäkymät. Optimoimalla jatkuvasti kromatografisia olosuhteita, valitsemalla sopivia liikkuvia ja paikallaan olevia vaiheita, ottamalla käyttöön uusia havaitsemistekniikoita ja laitteita, parantamalla sen tarkkuutta ja luotettavuutta lääkkeiden analysoinnissa ja tarjoamalla tehokkaampaa tukea lääkkeiden kehittämiselle, laadunvalvonnalle ja lääkkeiden käytölle.
Ansioita ja haittaa
Etu
Tehokas erottelu
HPLC -pylväskromatografia käyttää korkeapaine -infuusiopumppua ja korkean hyötysuhteen kiinteää vaihetta, mikä tekee pylvään tehokkuudesta paljon korkeamman kuin klassisen nestekromatografian ja voi toteuttaa kompleksisten seosten tehokkaan erottelun.
Korkea herkkyys
Varustettu korkeilla herkkyysilmaisimilla, kuten ultraviolettiilmaisimilla, fluoresenssinilmaisimilla jne., Voi havaita alhaiset näytteiden pitoisuudet, mikä on erityisen tärkeää hivenaalianalyysissä.
Laajalti käytetty
Sitä ei rajoita näytteen volatiliteetti ja lämpöstabiilisuus, ja se voi analysoida orgaanista ainetta, jolla on korkea kiehumispiste, huono lämpöstabiilisuus ja suuri suhteellinen molekyylimassa, ja sillä on laaja sovellus.
Hyvä valinta
Siirtymävaihetta on monenlaisia, ja erottelun selektiivisyyttä voidaan parantaa muuttamalla liikkuvan vaiheen tyyppiä ja koostumusta eri näytteiden analyyttisten vaatimusten täyttämiseksi.
Korkea automaatiotaso
Useimmat nykyaikaiset HPLC -instrumentit on varustettu automaattisella näytteenottimella ja dataprosessorilla, mikä voi toteuttaa analyysin automatisoinnin ja parantaa analyysin tehokkuutta.
Näytteen palautus on helppoa
Näytettä ei tuhota sen jälkeen, kun se on kulunut pylvään läpi, ja yksi komponentti voidaan kerätä tai laatia, mikä on kätevä seuraaville kokeille tai sovelluksille.
Puute
Nestemäisten kromatografien hinta- ja päivittäiset ylläpitokustannukset ovat korkeat, mukaan lukien pylvään korvaaminen, liikkuvan vaiheen kulutus ja instrumentin säännöllinen kalibrointi.
Vaikka HPLC -analyysiajat ovat nopeampia kuin klassinen nestekromatografia, se on edelleen suhteellisen pitkä verrattuna kaasukromatografiaan, etenkin kompleksien näytteiden erottamiseen ja analysointiin.
Vaikka HPLC -instrumentit ovat erittäin automatisoituja, instrumenttien käyttö ja ylläpito vaativat silti tietyn asiantuntemuksen ja kokemuksen. Lisäksi näytteiden esikäsittely voi olla monimutkainen.
Joidenkin yhdisteiden peruuttamattoman adsorption vuoksi paikallaan olevassa vaiheessa, näitä yhdisteitä ei välttämättä havaita tehokkaasti, mikä vaikuttaa analyysin tarkkuuteen.
Pylvään lämpötila vaikuttaa usein LC -erotteluun, ja yhdenmukaiset lämpötilaolosuhteet on ylläpidettävä toistettavien tulosten saamiseksi, mikä lisää kokeen monimutkaisuutta ja kustannuksia.
Varotoimenpiteet huumepitoisuuden määrittämisessä
 |
 |
 |
Tällä menetelmällä on monia varotoimenpiteitä lääkepitoisuuden määrittämiselle, mikä on erittäin tärkeää määritystulosten tarkkuuden ja luotettavuuden varmistamiseksi. Tässä on joitain keskeisiä näkökohtia:
Pylvään ero vaikuttaa lääkkeen retentiokäyttäytymiseen, vaikka pylvään pituus, sisähalkaisija, saman pylvään hiukkaskoko täyteaineen eri ominaisuuksien vuoksi, lääkkeen retentioaika ja huipputyyppi voivat olla suuresti erilaisia. Siksi asianmukainen sarake olisi valittava lääkkeen ominaisuuksien ja erottelutarpeiden mukaan.
Pylväs on ylläpidettävä säännöllisesti saastumisen ja tukkeutumisen välttämiseksi sen hyvän erottelun suorituskyvyn varmistamiseksi.
Liikkuvan faasin puskurisuolan pH: lla on merkittävä vaikutus lääkkeiden pidätyskäyttäytymiseen ja se voi jopa muuttaa joidenkin lääkkeiden huippujärjestystä. Siksi liikkuvan vaiheen optimoinnissa on kiinnitettävä erityistä huomiota puskurisuolan pH -arvoon.
Liikkuvan vaiheen koostumus vaikuttaa myös lääkkeen erotusvaikutukseen. Esimerkiksi multivitamiinivalmisteiden määrittämisessä natriumheksanesulfonaatin ja natriumheptaanisulfonaatin suhteellisen suhteen muutokset liikkuvassa faasissa vaikuttavat kunkin komponentin retentioaikaan ja huippumuotoon. Siksi asianmukainen liikkuvan faasin koostumus olisi valittava lääkkeen luonteen ja analyyttisten tarpeiden mukaan.
Näytteenkäsittelyprosessin tulisi varmistaa näytteen edustavuus ja stabiilisuus näytteen hajoamisen tai saastumisen välttämiseksi prosessoinnin aikana.
Kun punnitaan näytettä, additiivista menetelmää tulisi punnita se paikalleen kerralla punnituksen tarkkuuden varmistamiseksi. Samanaikaisesti punnitusoperaatio on standardisoitava vuotojen välttämiseksi.
Vertailun laadulla on suora vaikutus sisällön määrittämisen tulokseen. Siksi luotettavan, tarkan sisällön laatu tulisi valita.
Ohjaustuotteet tulisi tallentaa tarvittaessa hajoamisen tai saastumisen välttämiseksi. Jos ohjaustuote pidetään jääkaapissa, se tulisi lämmittää kuivausuunissa ennen punnitusta.
Asianmukainen ilmaisintyyppi tulisi valita lääkkeen luonteen ja analyyttisten tarpeiden, kuten ultravioletti -ilmaisimen, fluoresenssin ilmaisimen jne. Mukaan
Ilmaisin tulisi kalibroida määräajoin sen mittaustulosten tarkkuuden varmistamiseksi.
Mittaustietojen kohtuullinen tilastollinen analyysi tulosten luotettavuuden ja toistettavuuden varmistamiseksi. Esimerkiksi piikin alueen suhteellinen standardipoikkeama (RSD) voidaan laskea mittaustulosten tarkkuuden arvioimiseksi.
Sisältöä laskettaessa tulisi käyttää luotettavia menetelmiä, kuten ulkoisia tai sisäisiä standardeja, ja vakiokäyrän lineaarisuus olisi varmistettava.
Uuden sisällön määritysmenetelmän määrittämisessä olisi suoritettava metodologinen todentaminen, mukaan lukien spesifisyys, lineaarisuus, alue, tarkkuus, tarkkuus, kestävyys ja niin edelleen.
Metodologinen todentaminen on tärkeä keino varmistaa, että mittausmenetelmä on tieteellinen, kohtuullinen ja luotettava.
Varmista, että instrumentti pysyy vakaana analyysiprosessin aikana, varsinkin kun suoritettaessa multipin-analyysiä, kiinnitä huomiota tarkkailemaan, ovatko instrumentin vastearvo ja huippumuoto vakaa.
Jos epänormaalia tietoa tapahtuu analyysiprosessin aikana, se tulisi tarkistaa ja poistaa huolellisesti ja analysoida tarvittaessa uudelleen.
Suositut Tagit: HPLC -pylväskromatografia, Kiinan HPLC -pylväskromatografiavalmistajat, toimittajat, tehdas
Lähetä kysely
